15ª PRÁCTICA

19/02/2020
PRÁCTICA Nº15: "DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE SANGRE OCULTA EN HECES POR INMUNOCROMATOGRAFÍA"

OBJETIVO

• Determinación de sangre oculta en heces con el fin de diagnosticar neoplasias digestivas y anemias ferropénicas sin causa evidente.

PRINCIPIO DEL TEST
El test para la detección de sangre en muestras fecales ha sido diseñado para detectar hemoglobina humana a través de una interpretación visual en el cambio de color del test. El test contiene una tira con una capa de anticuerpos especiales para la detección de hemoglobina humana.Una almohadilla impregnada de hemoglobina con conjugado de oro con anticuerpos coloidales se ubica al final de la membrana. Si hay presencia de hemoglobina humana en la muestra fecal del paciente disuelta en solución salina, la mezcla de conjugado de oro coloidal y el extracto de la muestra se mueve a lo largo de la membrana cromatográficamente por acción capilar. Esta mezcla se desplaza luego al área de lectura (T), dando lugar a una línea visible de anticuerpos complejos al contactar con la hemoglobina humana.En caso de ausencia de hemoglobina humana en la muestra extraída, no aparecerá ninguna línea en el área de lectura (T). Por lo tanto, la presencia de una línea de color en el área de lectura (T) conlleva un resultado positivo. Siempre aparecerá una línea en el área de control del test (C), que sirve como indicador de buen funcionamiento.

UTILIDAD CLÍNICA
El cáncer de colon es uno de los cánceres más diagnosticados y aparece como la principal causa de muerte por cáncer. La realización del test en busca de cáncer de colon aumenta las probabilidades de un diagnóstico en las primeras etapas, conllevando una reducción de la mortalidad. Los primeros test FOB comercializados utilizaban el “método Guajak”, lo que requiere restricciones en la dieta para reducir la posibilidad de obtener falsos positivos o falsos negativos. Los test de detección de sangre en muestras fecales están especialmente diseñados para detectar hemoglobina humana en muestras fecales. El test se basa en un método inmunoquímico que gracias a la alta sensibilidad y especificidad mejora la detección de enfermedades del intestino grueso frente al método clásico Guajak.

MATERIALES

• Test NADAL FOB.
• Tubo colector: que contiene 2 mL de 0'1 M de PBS.
• Pipetas Pasteur.
• Cronómetro.
• Placas de Petri.
• Lancetas.
• Algodón humedecido con alcohol 96º. 
  
  
  
  

MUESTRA

• Heces frescas recogidas como máximo 12 horas antes del análisis y conservadas a 4ºC.

PROCEDIMIENTO

1. Depositar un trozo de la muestra de heces (aproximadamente del tamaño de un garbanzo) en una placa de Petri, ayudándonos de una pipeta Pasteur (recortada en forma de cuchara).
2. Depositar unas gotas de sangre capilar y remover (la hemos adulterado para que salga positivo en el test).
   
3. Posteriormente, cogimos el tubo colector verticalmente y abrimos el tapón azul. Extraer el aplicador (que tiene forma de rosca en el extremo), procurando evitar cualquier derrame o salpicadura del búfer desde el tubo recolector.
   
4. Recolectar la muestra introduciendo el aplicador en tres puntos diferentes de las heces.
   
5. Insertar el aplicador con la muestra otra vez en el tubo y cerrar bien el tapón.
6. Agitar bien el tubo de recolección para que la muestra se mezcle completamente con el búfer diluyente.
7. Desenroscar la tapa blanca protectora del tubo de recolección. Romper la punta del dispositivo mediante un movimiento giratorio utilizando papel.
8. Mantener el tubo recolector de forma vertical y añadir 3 gotas de la solución en el pocillo de prueba (S). Evitar que queden burbujas atrapadas en el pocillo de prueba (S) y no añadir ninguna solución en el área de lectura.
9. Interpretar el resultado a los 5 minutos. No interpretar transcurridos 10 minutos.
10. Repetir el procedimiento con la muestra de heces sin adulterar.

RESULTADOS
- Heces adulteradas con sangre capilar: Resultado positivo.
Han aparecido las dos líneas de color. Una en la zona de control (C) y la otra en la zona de test (T).
- Heces sin adulterar: Resultado negativo.
Sólo ha aparecido una línea en la zona de control (C) (prueba válida), no aparece línea en el área del test (T).

OBSERVACIONES

• Si no aparece la línea de control, la prueba será inválida.
• La intensidad del color de las líneas de la zona de test (T) puede variar dependiendo de la concentración de analitos en la muestra. Por eso, la aparición de una línea en la zona de test, independientemente de su intensidad, se considerará resultado positivo.
• Los resultados claramente positivos pueden aparecer antes.