11ª PRÁCTICA
06/02/2020
PRÁCTICA Nº11: "BILIRRUBINA DIRECTA"
OBJETIVO
La bilirrubina se origina por la degradación de la hemoglobina.
Es transportada del bazo al hígado y se excreta en la bilis.
La hiperbilirrubinemia es el resultado de un incremento de la bilirrubina en plasma. Causas más probables de la hiperbilirrubinemia:
- Bilirrubina Total: Aumento de la hemólisis, alteraciones genéticas, anemia neonatal, alteraciones eritropoyéticas, presencia de drogas.
- Bilirrubina Directa: Colestasis hepática, alteraciones genéticas y alteraciones hepáticas.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
FUNDAMENTO
La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido sulfanílico diazotado midiéndose fotométricamente. De las dos fracciones presentes en suero, bilirrubin-glucurónido y bilirrubina libre ligada a la albúmina, solo la primera reacciona en medio acuoso (bilirrubina directa) precisando la segunda la solubilización con dimetilsulfóxido (DMSO) para que reaccione (bilirrubina indirecta). En la determinación de la bilirrubina indirecta se determina también la directa, correspondiendo el resultado a la bilirrubina total.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de bilirrubina presente en la muestra ensayada.
APARATAJE
(A) Muestra / (A) Calibrador x Conc. Calibrador = mg/dL de bilirrubina.
RESULTADOS
- Absorbancia Patrón: 0'225 A.
- Absorbancia Muestra: 0'098 A.
(0'098/0'225) x 0'72 = 0'314 mg/dL.
El resultado se encuentra en valores superiores a los normales, por lo que se trataría de un caso de hiperbilirrubinemia, debida a colestasis hepática, alteraciones genéticas o alteraciones hepáticas.
VALORES DE REFERENCIA
Bilirrubina Directa: Hasta 0,25 mg/dL.
INTERFERENCIAS
La presencia de hemólisis disminuye el valor de bilirrubina.
Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren con la determinación de la bilirrubina.
PRÁCTICA Nº11: "BILIRRUBINA DIRECTA"
OBJETIVO
- Determinar la concentración de bilirrubina presente en la muestra del paciente por el método de DMSO. Colorimétrico.
La bilirrubina se origina por la degradación de la hemoglobina.
Es transportada del bazo al hígado y se excreta en la bilis.
La hiperbilirrubinemia es el resultado de un incremento de la bilirrubina en plasma. Causas más probables de la hiperbilirrubinemia:
- Bilirrubina Total: Aumento de la hemólisis, alteraciones genéticas, anemia neonatal, alteraciones eritropoyéticas, presencia de drogas.
- Bilirrubina Directa: Colestasis hepática, alteraciones genéticas y alteraciones hepáticas.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
FUNDAMENTO
La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido sulfanílico diazotado midiéndose fotométricamente. De las dos fracciones presentes en suero, bilirrubin-glucurónido y bilirrubina libre ligada a la albúmina, solo la primera reacciona en medio acuoso (bilirrubina directa) precisando la segunda la solubilización con dimetilsulfóxido (DMSO) para que reaccione (bilirrubina indirecta). En la determinación de la bilirrubina indirecta se determina también la directa, correspondiendo el resultado a la bilirrubina total.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de bilirrubina presente en la muestra ensayada.
APARATAJE
- Espectrofotómetro.
- Gradilla.
- 6 tubos de ensayo de 3 mL.
- Rotulador permanente.
- Pipetas automáticas de 50 microlitros y de 100-1000 microlitros.
- Puntas de pipeta azules y amarillas.
- Tapones azules para los tubos de ensayo.
- Bote de orina ("contenedor de desechos").
- Cubetas de espectrofotometría.
- Papel para limpiar las paredes de las cubetas de espectrofotometría antes de realizar la medición de cada absorbancia.
- R1: Ácido sulfanílico (30 mmol/L) y Ácido clorhídrico (HCl) (150 mmol/L).
- R2: Sodio nitrito (29 mmol/L).
- Suero problema.
- Encender el espectrofotómetro.
- Rotular 6 tubos de ensayo de 3 mL como "Blanco", "Patrón", y los otros 4 tubos de ensayo con las iniciales de nuestros nombres.
- Pipetear:
- 1,5 mL (=1500 microlitros) del reactivo 1 en cada uno de los 6 tubos de ensayo.
- Depositar 50 microlitros del reactivo 2 en el los tubos de las muestras de cada uno y en el del patrón.
- Depositar 100 microlitros del suero y del Calibrador en cada uno de los tubos.
- Mezclar e incubar 5 minutos a 15-25ºC (temperatura ambiente).
- Leer la absorbancia (A) en el espectrofotómetro a 578 nm.
(A) Muestra / (A) Calibrador x Conc. Calibrador = mg/dL de bilirrubina.
RESULTADOS
- Absorbancia Patrón: 0'225 A.
- Absorbancia Muestra: 0'098 A.
(0'098/0'225) x 0'72 = 0'314 mg/dL.
El resultado se encuentra en valores superiores a los normales, por lo que se trataría de un caso de hiperbilirrubinemia, debida a colestasis hepática, alteraciones genéticas o alteraciones hepáticas.
VALORES DE REFERENCIA
Bilirrubina Directa: Hasta 0,25 mg/dL.
INTERFERENCIAS
La presencia de hemólisis disminuye el valor de bilirrubina.
Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren con la determinación de la bilirrubina.
- Hemos realizado 1 Blanco y 1 Patrón por mesa.
- El reactivo 1 puede ser corrosivo para los metales. Provoca quemaduras graves en la piel y lesiones oculares graves. Contiene ácido sulfanílico.
- El desarrollo de color en el reactivo 2, indica deterioro del reactivo.
- La estabilidad del suero es de 4 días a 2-8ºC o 2 meses a -20ºC.
- Para la determinación de la bilirrubina en neonatos, pipetear 50 microlitros de muestra. Multiplicar el resultado obtenido por 2.
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