10ª PRÁCTICA
30/01/2020
PRÁCTICA Nº10: "DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE CREATININA"
OBJETIVO
La creatinina es el resultado de la degradación de la creatina, componente de los músculos y puede ser transformada en ATP, fuente de energía para las células.
La producción de creatinina depende de la modificación de la masa muscular. Varía poco y los niveles suelen ser muy estables.
Se elimina a través del riñón. En una insuficiencia renal progresiva hay una retención en sangre de urea, creatinina y ácido úrico.
Niveles altos de creatinina son indicativos de patología renal.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
FUNDAMENTO
El ensayo de la creatinina está basado en la reacción de la creatinina con el picrato de sodio descrito por Jaffé.
La creatinina reacciona con el picrato alcalino formando un complejo rojizo. El intervalo de tiempo escogido para las lecturas permite eliminar gran parte de las interferencias conocidas del método.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de creatinina en la muestra ensayada.
APARATAJE
En primer lugar, debemos encender el espectrofotómetro para que se vaya calentando.
Antes de proceder a la realización de la práctica, debemos preparar el reactivo de trabajo (RT). Para ello, mezclar volúmenes iguales de R1 Reactivo Pícrico y de R2 Reactivo Alcalinizante.
Una vez preparado el reactivo de trabajo, rotular 3 tubos de ensayo de 3 mL y pipetear:
RESULTADOS
Patrón:
- A1 (30 segundos): 0'006 A.
- A2 (90 segundos): 0'036 A.
Muestra:
- A1 (30 segundos): 0'129 A.
- A2 (90 segundos): 0'185 A.
(0'185-0'129) / (0'036 - 0'006) x 2 = 3'73 mg/dL de creatinina en la muestra.
El resultado de la concentración de creatinina no está dentro de los valores normales, por lo que se trataría de una insuficiencia renal.
VALORES DE REFERENCIA
Los valores normales de creatinina en suero son:
- Hombres: 0,7-1,4 mg/dL.
- Mujeres: 0,6-1,1 mg/dL.
INTERFERENCIAS
Hemoglobina (1 g/L), Bilirrubina (55 mg/dL) interfiere.
OBSERVACIONES
PRÁCTICA Nº10: "DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE CREATININA"
OBJETIVO
- Determinar la concentración de creatinina presente en la muestra del paciente mediante la medida de las absorbancias por espectrofotometría y por el método Jaffé (colorimétrico-cinético).
La creatinina es el resultado de la degradación de la creatina, componente de los músculos y puede ser transformada en ATP, fuente de energía para las células.
La producción de creatinina depende de la modificación de la masa muscular. Varía poco y los niveles suelen ser muy estables.
Se elimina a través del riñón. En una insuficiencia renal progresiva hay una retención en sangre de urea, creatinina y ácido úrico.
Niveles altos de creatinina son indicativos de patología renal.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
FUNDAMENTO
El ensayo de la creatinina está basado en la reacción de la creatinina con el picrato de sodio descrito por Jaffé.
La creatinina reacciona con el picrato alcalino formando un complejo rojizo. El intervalo de tiempo escogido para las lecturas permite eliminar gran parte de las interferencias conocidas del método.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de creatinina en la muestra ensayada.
APARATAJE
- Espectrofotómetro.
- Gradilla.
- 3 tubos de ensayo de 3 mL.
- Rotulador permanente.
- Cronómetro.
- 2 pipetas automáticas de 100-1000 microlitros y de 10-100 microlitros.
- Puntas de pipeta amarillas y azules.
- Bote de orina ("contenedor de desechos").
- Cubetas de espectrofotometría.
- Papel para limpiar las paredes de las cubetas de espectrofotometría antes de realizar la medición de cada absorbancia.
- R1: Reactivo Pícrico (Ácido pícrico 17,5 mmol/L).
- R2: Reactivo Alcalinizante (Hidróxido sódico 0,29 mol/L).
- CREATININE CAL: Patrón primario acuoso de Creatinina 2 mg/dL.
- Suero.
En primer lugar, debemos encender el espectrofotómetro para que se vaya calentando.
Antes de proceder a la realización de la práctica, debemos preparar el reactivo de trabajo (RT). Para ello, mezclar volúmenes iguales de R1 Reactivo Pícrico y de R2 Reactivo Alcalinizante.
Una vez preparado el reactivo de trabajo, rotular 3 tubos de ensayo de 3 mL y pipetear:
- 1 mL (=1000 microlitros) del reactivo de trabajo en cada uno de los tres tubos de ensayo.
- 100 microlitros de CREATININE CAL en el tubo de ensayo rotulado como "Patrón".
- 100 microlitros de suero del paciente en el tubo rotulado como "Muestra".
- Mezclar y poner en marcha el cronómetro.
- Homogeneizar la disolución.
- Depositarla en una cubeta de espectrofotometría y leer la absorbancia (A1) a 492 nm al cabo de 30 segundos, y al cabo de 90 segundos (A2) de la adición de la muestra; es decir, 60 segundos después de haber medido la absorbancia 1.
Nota: Antes de medir las absorbancias de la muestra, repetir el mismo procedimiento con el tubo "Patrón".
- Calcular la variación de las absorbancias.
Patrón:
- A1 (30 segundos): 0'006 A.
- A2 (90 segundos): 0'036 A.
Muestra:
- A1 (30 segundos): 0'129 A.
- A2 (90 segundos): 0'185 A.
(0'185-0'129) / (0'036 - 0'006) x 2 = 3'73 mg/dL de creatinina en la muestra.
El resultado de la concentración de creatinina no está dentro de los valores normales, por lo que se trataría de una insuficiencia renal.
VALORES DE REFERENCIA
Los valores normales de creatinina en suero son:
- Hombres: 0,7-1,4 mg/dL.
- Mujeres: 0,6-1,1 mg/dL.
INTERFERENCIAS
Hemoglobina (1 g/L), Bilirrubina (55 mg/dL) interfiere.
OBSERVACIONES
- Hemos realizado un Blanco por aparato (espectrofotómetro) (2 Blancos en total para toda la clase), un Patrón por mesa y una muestra por pareja de alumnos.
- Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensación.
- Hay que tener en cuenta que los reactivos 1 y 2 provocan quemaduras graves en la piel y lesiones oculares graves. Mientras que el Patrón, puede ser corrosivo para los metales.
- Estabilidades:
- Reactivo de trabajo (RT): 15 días a 2-8ºC o 7 días a temperatura ambiente (15-25ºC).
- Creatinina: 24 horas a 2-8ºC.
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