2ª PRÁCTICA

PRÁCTICA Nº 2: "EASY RID MULTIPLATE"

OBJETIVO
Poder cuantificar las plasmaproteínas en el suero y plasma a través de las placas de inmunodifusion radial.

UTILIDAD CLÍNICA
Easy Rid Multiplate son placas para la determinación cuantitativa en inmunodifusion radial de las plasmaproteínas humanas en el suero y plasma.

FUNDAMENTO

Permite la determinación de las plasmaproteinas humanas por medio de la inmunodifusion radial simple.
La determinación simultánea es permitida por la presencia, en la misma placa, de diferentes geles, distinguidos por el color y cada específico por la proteína a investigar.

El antígeno, aplicado en un pocillo de la placa, difunde de modo radial en la base de agarosa, reaccionando con el anticuerpo especifico incorporado en la propia agarosa y formando un anillo visible de precipitado.

El diámetro del anillo es proporcional a la cantidad de antígeno presente en la muestra.

COMPOSICIÓN

• Contiene, en diferentes geles de agarosa, los antisueros monoespecíficos producidos inmunizando conejos o cabras.

APARATAJE

Esta práctica no precisa de ningún aparato.

MATERIALES

• Pipeta automática de 5 microlitros.
• Puntas amarillas.
• Contenedor de desechos (bote de orina).
• Placa EASY RID MULTIPLATE.
• Regla.
• Gradilla.
  

MUESTRA

• Plasma fresco.

REACTIVOS

• -h-IgG/IgA/IgM.
• Plasmaproteína IgG: color del gel verde.
• Plasmaproteína IgA:color del gel rojo.
• Plasmaproteína IgM: color del gel azul.

PROCEDIMIENTO

1. Extraer la placa de su sobre, abrirla y dejarla 5 minutos a temperatura ambiente para permitir la evaporación de las gotitas de agua de condensación en los pocillos.
   
2. Aplicar con una pipeta 5 microlitros de la muestra en el pocillo relativo a la plasmaproteína de investigación.
   
   
   
   
   
   Nota: cada alumno de la clase hemos aplicado el plasma en un pocillo de la placa, en mi caso, he elegido un pocillo de la IgA (color del gel rojo), exactamente en el pocillo situado en el extremo derecho del gel (pocillo nº 1 del gel rojo).
3. Dejar absorber por unos 20 minutos, cerrar la placa con su tapa y girarla.
4. Guardar la placa en su sobre y dejarla en posición horizontal plano, a temperatura ambiente, durante 48 horas.
   

RESULTADOS
Al día siguiente de clase, hemos procedido a la medición del diámetro de los halos en mm con la regla.
Posteriormente, leer en las tablas adjuntas según el diámetro de los precipitados, el valor de las concentraciones de la proteína.
El diámetro del halo del pocillo de la placa en el que apliqué los 5 microlitros del plasma es:  6'3 mm, por lo que presenta una concentración de IgA de 241'0 mg/dL.

OBSERVACIONES

• La aplicación de una muestra con una concentración proteica inferior al valor mínimo de medida lleva a la formación de un anillo de difícil medición, en este caso se aconseja usar instrumentos de lectura con sensibilidad mayor. De lo contrario, la aplicación de una muestra con una concentración proteica superior al valor máximo de referencia lleva a la formación de un anillo no medible, en este caso se aconseja diluir la muestra.
• Todas las variantes del producto EASY RID MULTIPLATE contienen sodio azida. El sodio azida en contacto con metales pesados como cobre y/o plomo puede formar azidas explosivas. Todas las configuraciones contienen sodio azida en la concentración < 1g/L.
• Una placa parcialmente utilizada puede ser utilizada por 3 semanas a partir de la apertura del envase. Después de cada empleo, se recomienda guardar la placa girada en su propio sobre y conservarla a 2-8ºC.
• No congelar.
• Las muestras turbias o con partículas en suspensión tienen que ser clarificadas mediante centrifugación.
• Las muestras frescas, si no se pueden utilizar enseguida, se pueden congelar inmediatamente después de la toma y ser utilizados posteriormente.